Őssejt-betakarítás előnyei és hátrányai
Tartalom
Szigetelés, szétválasztás és tisztítás Absztrakt A sejttenyészet környezetében a makrofágok erősen tapadó sejtek. A makrofágok betakarításának jelenleg alkalmazott módszerei hátránya, hogy csökkentik a sejtek életképességét és képesek a vetés után újracsatolni. Habár a hőre érzékeny felületeket a sejtlapok betakarítására alkalmazták, nem áll rendelkezésre jelentés arról, hogy ezeket használják fel előpolarizált makrofágok betakarítására.
- AZ ŐSSEJT-KUTATáS ELŐNYEI éS HáTRáNYAI - HUMÁN TÁRGYAK -
- Csontvelő és őssejt transzplantáció - Nyomás
- Az embrionális őssejtek alternatívái Az embrionális őssejtkutatás etikájával kapcsolatos viták évek óta megosztják a tudósokat, politikusokat és vallási csoportokat.
- Egyre több az egygyermekes család.
- B: Idegsejtekpélda sejttípusra differenciálódás után.
- Milyen edamame egészségügyi előnyei vannak? - Táplálkozás / étrend -
Kimutattuk, hogy ez az eljárás jelentősen javítja az élő makrofágok hozamát és a későbbi sejtek újracsatlakozásának százalékos arányát, miközben minimális hatást gyakorol a sejtfenotípusra. Emellett világossá vált, hogy a makrofágoknak fontos szabályozási funkciójuk van a szövetek regenerációjával és az implantátum integrációjával kapcsolatban.
A makrofágok a nyugalmi állapotuk mellett M - vagy naiv 3 különböző sejtpolarizációs állapotokat mutathatnak. Jelenleg a polarizáció leggyakrabban leírt funkcionális állapota az M1-szerű gyulladásos és M2-szerű regeneratív fenotípusok és azok aktiválási állapotfüggő al-állapotai 3. A nyugalmi állapotú makrofágok M1-szerű és M2-szerű makrofágok felé történő polarizálása érdekében a tenyésztőközeghez polarizáló szereket adunk.
Például az M1-szerű makrofágok előállításához általában a lipopoliszacharidokat LPS vezetjük be. Azonban az LPS nem csak a makrofágokat polarizálja, hanem adszorbeálódik a szubsztrátumra és ezzel szennyezi azt 4. Ez a szennyeződés valószínűleg meghamisítja a kísérleti eredményt, mivel zavarhatja a makrofág és a biomateriális kölcsönhatást, vagy közvetlenül befolyásolhatja a sejteket, még akkor is, ha a tápközeget LPS-mentes tápközeggel helyettesítjük 4, 5, 6.
A makrofágok összegyűjtésével és utána vetésével polarizáló szereket tartalmazó közeget használva az utóbbiak megkerülhetők.
Előpolarizált makrofágok betakarítása termikusan érzékeny szubsztrátokkal
A tenyésztett makrofágok, különösen az aktivált makrofágok egyik közös kenőcslista, hogy nagyon erős tapadást mutat bármely 7, 8, 9 szubsztrátumhoz, és ennek következtében nehezen betakarítható. A szöveti tenyésztéssel kezelt polisztirol TCPS felületeken termesztett makrofágok betakarításának általánosan alkalmazott módszerei olyan mechanikus kezelések, mint a 10 kaparás, a kalcium kelátképző szerrel etilén-diamin-tetra-ecetsav EDTA kezelése a következő kaparással vagy anélkül 11, 12, 13, enzimatikus kezelés, pl.
Azonban a szubsztrátumhoz való erős tapadás miatt ezek a klasszikus módszerek viszonylag alacsonyak a sejtek betakarításához. A betakarítási módszertan befolyásolhatja őssejt-betakarítás előnyei és hátrányai betakarított sejtek életképességét, és befolyásolhatja és megváltoztathatja ezen erősen érzékeny sejttípus 17 funkcionális állapotát.
Például arról számoltak be, hogy a tripszin kezelés nagymértékben befolyásolhatja a sejtmembrán fehérje összetételét, a sejt és a közeg komponenseinek reaktivitását legalább átmenetileg és a 18, 19, 20 sejtmembrán permeabilitását. Ezen túlmenően a betakarított előpolarizált makrofágok kísérleti alkalmazásának egyik korlátozó tényezője lehet a sejtek fenotípusos stabilitása, azaz a sejtek betakarításával és újrakezelésével kiváltott stressz befolyásolhatja ezt a fenotípus stabilitást Már betakarítás nélkül is ismert, hogy az M1- és az M2-szerű makrofágok visszanyerik a nyugalmi állapotú fenotípust, ha a tápközeget polarizáló szerek nélküli közegben helyettesítik és tenyésztik Ezek a sejtek a Több mint két évtizeddel ezelőtt Yamada és munkatársai új enzimmentes eljárást vezettek be a sejtlapok visszanyerésére egy TCPS szubsztrát segítségével, amely hőre reagáló poli N-izopropil-akril-amid pNIPAm 22 volt.
A polimer átmeneti hőmérséklete alatt a hőérzékeny kefék konformációja megváltozik, és a felület fehérje-visszaszorítóvá válik. Ennek következtében a sejtek, amelyek ezeken a fehérjéken keresztül kapcsolódnak a felülethez, felszabadulnak a felületről.
Itt közöljük, hogy a kereskedelemben kapható pNIPAm-alapú termikusan reagáló felületek alkalmazása a tenyésztésre, polarizálásra és a makrofágok betakarítására jobb, mint a szokásos módszer, azaz a TCPS-en való termesztés és az EDTA és a kaparás alkalmazásával történő betakarítás.
Egy gyerek nem gyerek?
Az EDTA és a kaparás mint referencia-betakarítási eljárás kiválasztása az irodalom 23, 24 és saját tapasztalatunk alapján történt; az enzim alapú módszerekkel összehasonlítva a legnagyobb sejthozamot adta. Soros kísérleti eljárást határoztunk meg a pNIPAm-alapú módszertan 1. A fenti kérdések megválaszolására a humán THP-1 monocita leukémia sejtvonalat választották modellként, mivel a sejtes folyamatok jól jellemezhetők, és mivel az egyik legelterjedtebb sejtvonal a monociták működésének és szabályozásának vizsgálatára.
Kísérleti felépítésünk segítségével az alábbi eredményeket kaptuk: A THP-1 monocita sejtek differenciálódásának módszerét bemutató kísérleti rendszer vázlata a vizsgált M -M1- és M2-szerű makrofágok felé a és az időbeli sorrend és az analízis időpontjai b. Basal: sejtek bazális táptalajban; pol: sejtek polarizáló közegben, amelyek polarizáló vegyületeket tartalmaznak.
Az őssejt-kutatás előnyei és hátrányai
Teljes méretű kép A THP-1 sejtek aktiválása a tapadó M - nyugalmi állapot felé Őssejt-betakarítás előnyei és hátrányai a primer sejtekkel, a sejtvonalakból származó monociták, mint az ebben a vizsgálatban alkalmazott humán THP-1, az M - állapotra történő éréshez stimulációt igényelnek.
Az indukcióhoz forbolmirisztátacetátot PMA használtunk. A szokásos nM PMA koncentrációt választottuk ki a következő vizsgálathoz. A 4 független kísérletből nyert adatokat átlag ± sdev értékként adjuk meg. Az alap tápközegben tenyésztett sejteket feltételezzük, hogy a nyugalmi állapotú M - makrofágszerű fenotípust expresszálják. A TCPS és a pNIPAm M1-szerű vagy M2-szerű sejtjeire polarizált makrofágok, amint azt a génexpresszió és a citokin felszabadulás jelzi 6 és 24 óra után, illetve 24 órával a kezelés megkezdése után 3.
Milyen edamame egészségügyi előnyei vannak? - Táplálkozás / étrend - 2021
Az IL 6 órás génexpressziója után 6 és 24 óra elteltével az IL fehérje koncentrációját a közegben M1-szerű polarizált sejtekben növeltük. Az ILet a makrofágok néhány M2-szerű al-állapotának markereként jelentették, de az M1-szerű sejtek esetében is 3, 31, Ez összhangban van Fan és munkatársaival, akik arról számoltak be, hogy a nem stimulált RAW A három független kísérlet adatait átlag ± sdev értékként adjuk meg.
Az adatokat átlag ± sdev értékként mutatjuk be 3 független kísérletben. Továbbá kevesebb időre volt szükség a makrofágok pNIPAm-alapú hőemelkedési technikával történő összegyűjtéséhez, összehasonlítva az EDTA-val és a kaparás mint sejt-betakarítási módszer.
Ezt megerősítette a csatolt sejtekből származó teljes DNS mennyiségének kvantitatív meghatározása 24 órával a vetés után 3b.
Adataink azt mutatják, hogy nemcsak kevesebb élő sejtet kapunk ezzel az általánosan alkalmazott módszerrel, hanem azt is, hogy a kémiai EDTA plusz mechanikai kaparási stressz jelentősen csökkenti a sejtek potenciálját, hogy a betakarítás után újra hozzákapcsolódjon a TCPS-hez.
Ábra, d; Kiegészítő 2. Egy másik kulcsfontosságú szempont az erősen érzékeny 21 sejttípus fenotípusos stabilitása. Ezt a stabilitást a betakarítási eljárás alapján módosíthatjuk eltérően. A fenotípusos stabilitást az M1-szerű és az M2-szerű specifikus génexpresszió összehasonlításával határoztuk meg a TCPS-ből és a pNIPAm-ből gyűjtött sejt újraindítása után, majd ezt követően a tápközegben polarizáló komponensek nélkül vagy anélkül.
Nem találtunk egyértelmű különbségeket a génexpresszióban, összehasonlítva az azonos módon kezelt tenyészeteket, hanem különböző módon betakarítottuk. Megjegyezzük azonban, hogy a szubsztrátumtól és a kezdeti polarizációs protokolltól függetlenül a polarizáció mértéke nagymértékben függ a polarizációs ágensek folyamatos jelenlététől.
Csontvelő és őssejt transzplantáció Nyomás Az iLive tartalmát az egészségügyi szakemberek ellenőrzik, hogy a lehető legjobb pontosságot és a tényekkel való összhangot biztosítsák. Szigorú szabályok vonatkoznak az információforrások megválasztására, és csak jó hírű webhelyekre, tudományos kutatóintézetekre és lehetőség szerint igazolt orvosi kutatásokra utalunk. Felhívjuk figyelmét, hogy a zárójelben szereplő számok [1], [2] stb. Interaktív linkek az ilyen tanulmányokhoz.
Megfigyeltük, hogy az M1-szerű polarizált sejtek esetében az LPS és az IFγ elhagyása a reseeding közegben az M1-szerű de nem az M2-szerű sejt markerek expressziójának őssejt-betakarítás előnyei és hátrányai csökkenését eredményezte. Hasonlóképpen, az M2-szerű polarizált sejtek esetében az IL-4 elhagyása az M2-szerű de nem az M1-szerű sejt markerek expressziójának jelentős csökkenését eredményezte.
Következésképpen a polarizáló ágensek hiányában az előre polarizált sejtek vizsgálatára egyértelmű időhatárok vannak.
A hőérzékeny felületek pihenőállapot és polarizált makrofágok betakarításának előnyei az alábbiak szerint foglalhatók össze: i a monociták aktiválódhatnak a nyugalmi állapotú makrofágok felé és polarizálódhatnak az M1- és M2-szerű funkcionális állapotok felé, amelyek közel azonosak a TCPS-nél ; ii a módszertan lehetővé teszi, hogy a sejtek életképességének veszélyeztetése nélkül a sejtek nagyon szelídizolálódjanak, ami ellentétben a TCPS-től való betakarítással; iii a pNIPAm-ből gyűjtött élő makrofágok képessége őssejt-betakarítás előnyei és hátrányai megnövekszik; iv a pNIPAm-ből származó és a TCPS-re visszahelyezett sejtek hasonló tulajdonságokkal rendelkeznek, mint a nem betakarítottak; v a betakarítási eljárás nem befolyásolja a fenotípusos stabilitást, és vi a jelen módszer lehetővé teszi az előpolarizált makrofágok és a biomateriális felületek közötti kölcsönhatások őssejt-betakarítás előnyei és hátrányai polarizáló szerek nélkül.
Jelen tanulmányban ezeket a sejteket az M1- és az M2-szerűnek nevezzük, mint a jelenleg általánosan használt jelölést pl.
Ezután a pNIPAm lemezeket alapfelülettel a hűtőszekrényben percig lehűtöttük, hogy a sejteket ki lehessen engedni a lemezről. A fennmaradó csatolt sejteket egy szelíd ismétlődő pipettával szuszpendáljuk.
Az otthonszülés előnyei és hátrányai - 2015.02.23. - ptigroup.hu
Abban az esetben, ha a makrofágokat TCPS lemezeken tenyésztettük, a sejteket 37, 38 szerint gyűjtöttük össze. A hőmérséklet 37 ° C-ról 4 ° C-ra történő csökkenése ismert, hogy csökkenti a sejt-szubsztrát tapadási szilárdságát Az izolált sejteket közvetlenül utána mossuk bazális tápközeg alkalmazásával.
A kapott tenyészeteket 24 órán át tenyésztjük. A pNIPAm és a TCPS lemezek teljesítményének összehasonlítása és a betakarítási eljárás hatásának értékelése érdekében a tenyészeteket 4 különböző időpontban elemeztük 1.
- Lábak artrózisával, 1 fokos kezelés
- Őssejt - Stem cell - ptigroup.hu
- Hajátültetés - Hair transplantation - ptigroup.hu
- Egy gyerek nem gyerek? | Új Nő
A második tenyészetcsoportból a teljes DNS-t meleg PBS-sel végzett mosás után határoztuk meg, és egy harmadik csoport mRNS-t izoláltunk a génexpresszió értékelésére 6 és 24 óra a polarizáció megkezdése után.
A fennmaradó tenyészetekből az mRNS izolált a génexpresszió értékelésére. A ciklus körülményei a következők voltak: kezdeti 95 ° C-on 3 percig, majd 40 ciklusban 95 ° C-on 10 másodpercig és 57 ° C-on 30 másodpercig. Ezután az olvadási görbét 65 ° C-ról 95 ° C-ra melegítjük ébredés izületi fájdalommal, 5 ° C hőmérsékletű lépésekben.
